Javascript is momenteel uitgeschakeld in uw browser.Als javascript is uitgeschakeld, werken sommige functies van deze website niet.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Department of Science, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonië, Spanje * Deze auteurs hebben enig inzicht in dit werk Equal bijdrage achtergrond: Hyaluronzuur (HA) is een natuurlijk voorkomend polysacharide dat wordt gebruikt bij de productie van huidvullers voor esthetische doeleinden.Omdat het een halfwaardetijd van meerdere dagen heeft in menselijke weefsels, zijn op HA gebaseerde dermale vullers chemisch gemodificeerd om hun levensduur in het lichaam te verlengen.De meest voorkomende modificatie in commerciële op HA gebaseerde vulstoffen is het gebruik van 1,4-butaandioldiglycidylether (BDDE) als verknopingsmiddel om de HA-ketens te verknopen.Resterend of niet-gereageerd BDDE wordt als niet-toxisch beschouwd bij <2 delen per miljoen (ppm);daarom moet de resterende BDDE in de uiteindelijke dermale vuller worden gekwantificeerd om de veiligheid van de patiënt te garanderen.Materialen en methoden: Deze studie beschrijft de detectie en karakterisering van een bijproduct van de verknopingsreactie tussen BDDE en HA onder alkalische omstandigheden door vloeistofchromatografie en massaspectrometrie (LC-MS) te combineren.Resultaten: Na verschillende analyses bleek dat de alkalische omstandigheden en hoge temperatuur die werden gebruikt om de HA-BDDE-hydrogel te desinfecteren, de vorming van dit nieuwe bijproduct, de "propyleenglycol-achtige" verbinding, bevorderden.LC-MS-analyse bevestigde dat het bijproduct dezelfde mono-isotopische massa heeft als BDDE, een andere retentietijd (tR) en een andere UV-absorptie (λ=200 nm) modus.In tegenstelling tot BDDE werd bij LC-MS-analyse waargenomen dat dit bijproduct onder dezelfde meetomstandigheden een hogere detectiesnelheid heeft bij 200 nm.Conclusie: Deze resultaten geven aan dat er geen epoxide in de structuur van deze nieuwe verbinding zit.De discussie staat open om het risico te beoordelen van dit nieuwe bijproduct dat wordt aangetroffen bij de productie van HA-BDDE-hydrogel (HA-dermale vuller) voor commerciële doeleinden.Trefwoorden: hyaluronzuur, HA dermale vuller, verknoopt hyaluronzuur, BDDE, LC-MS analyse, BDDE bijproduct.
Fillers op basis van hyaluronzuur (HA) zijn de meest voorkomende en populaire dermale fillers die voor cosmetische doeleinden worden gebruikt.1 Deze dermale vuller is een hydrogel, meestal samengesteld uit >95% water en 0,5-3% HA, waardoor ze een gelachtige structuur krijgen.2 HA is een polysacharide en het hoofdbestanddeel van de extracellulaire matrix van gewervelde dieren.Een van de ingrediënten.Het bestaat uit (1,4)-glucuronzuur-β (1,3)-N-acetylglucosamine (GlcNAc) herhalende disaccharide-eenheden verbonden door glycosidische bindingen.Dit disacharidepatroon is in alle organismen hetzelfde.Vergeleken met sommige op eiwitten gebaseerde vulstoffen (zoals collageen), maakt deze eigenschap HA tot een zeer biocompatibel molecuul.Deze vulstoffen kunnen een aminozuursequentiespecificiteit vertonen die kan worden herkend door het immuunsysteem van de patiënt.
Bij gebruik als huidvuller is de belangrijkste beperking van HA de snelle omzetting in de weefsels vanwege de aanwezigheid van een specifieke familie van enzymen die hyaluronidasen worden genoemd.Tot dusver zijn verschillende chemische modificaties in de HA-structuur beschreven om de halfwaardetijd van HA in weefsels te verlengen.3 De meeste van deze modificaties proberen de toegang van hyaluronidase tot polysacharidepolymeren te verminderen door HA-ketens te verknopen.Daarom produceert de verknoopte HA-hydrogel, vanwege de vorming van bruggen en de intermoleculaire covalente bindingen tussen de HA-structuur en het verknopingsmiddel, meer anti-enzymafbraakproducten dan het natuurlijke HA.4-6
Tot dusverre omvatten de chemische verknopingsmiddelen die gebruikt worden om verknoopt HA te produceren methacrylamide, 7 hydrazide, 8 carbodiimide, 9 divinylsulfon, 1,4-butaandiol diglycidylether (BDDE) en poly(ethyleenglycol) diglycidylether.10,11 BDDE is momenteel het meest gebruikte verknopingsmiddel.Hoewel bewezen is dat dit soort hydrogels al tientallen jaren veilig zijn, zijn de gebruikte verknopingsmiddelen reactieve reagentia die cytotoxisch en, in sommige gevallen, mutageen kunnen zijn.12 Daarom moet hun restgehalte in de uiteindelijke hydrogel hoog zijn.BDDE wordt als veilig beschouwd wanneer de restconcentratie lager is dan 2 delen per miljoen (ppm).4
Er zijn verschillende methoden om de BDDE-concentratie met een laag residu, de mate van verknoping en de substitutiepositie in HA-hydrogels te detecteren, zoals gaschromatografie, chromatografie met uitsluiting op grootte in combinatie met massaspectrometrie (MS), meetmethoden voor fluorescentie met kernmagnetische resonantie (NMR), en Diode-array gekoppelde hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC).13-17 Deze studie beschrijft de detectie en karakterisering van een bijproduct in de uiteindelijke verknoopte HA-hydrogel die wordt geproduceerd door de reactie van BDDE en HA onder alkalische omstandigheden.HPLC en vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS-analyse).Aangezien de toxiciteit van dit bijproduct van BDDE onbekend is, raden we aan om de kwantificering van het residu op een vergelijkbare manier te bepalen als de methode die gewoonlijk wordt uitgevoerd op BDDE in het eindproduct.
Het verkregen natriumzout van HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japan) heeft een molecuulgewicht van ~ 1.368.000 Da (Laurent-methode) 18 en een intrinsieke viscositeit van 2,20 m3/kg.Voor de verknopingsreactie werd BDDE (~ 95%) gekocht bij Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, VS).Met fosfaat gebufferde zoutoplossing met pH 7,4 werd gekocht bij Sigma-Aldrich Company.Alle oplosmiddelen, acetonitril en water die in de LC-MS-analyse werden gebruikt, werden gekocht van HPLC-kwaliteit.Mierenzuur (98%) wordt gekocht als reagenskwaliteit.
Alle experimenten werden uitgevoerd op een UPLC Acquity-systeem (Waters, Milford, MA, VS) en verbonden met een API 3000 drievoudige quadrupoolmassaspectrometer uitgerust met een elektrospray-ionisatiebron (AB SCIEX, Framingham, MA, VS).
De synthese van verknoopte HA-hydrogels werd gestart door 198 mg BDDE toe te voegen aan een 10% (w/w) natriumhyaluronaat (NaHA)-oplossing in aanwezigheid van 1% alkali (natriumhydroxide, NaOH).De uiteindelijke BDDE-concentratie in het reactiemengsel was 9,9 mg/ml (0,049 mM).Vervolgens werd het reactiemengsel grondig gemengd en gehomogeniseerd en men liet het gedurende 4 uur bij 45°C verlopen.19 De pH van de reactie wordt op ~12 gehouden.
Daarna werd het reactiemengsel gewassen met water en werd de uiteindelijke HA-BDDE-hydrogel gefiltreerd en verdund met PBS-buffer om een HA-concentratie van 10 tot 25 mg/ml en een uiteindelijke pH van 7,4 te bereiken.Om de geproduceerde verknoopte HA-hydrogels te steriliseren, worden al deze hydrogels geautoclaveerd (gedurende 20 minuten bij 120 °C).De gezuiverde BDDE-HA-hydrogel wordt tot analyse bij 4°C bewaard.
Om het BDDE dat aanwezig is in het verknoopte HA-product te analyseren, werd een monster van 240 mg gewogen en in het middelste gat (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, VS; volume 0,5 ml) gebracht en bij kamertemperatuur bij 10.000 rpm gecentrifugeerd. 10 minuten.Een totaal van 20 µL pull-down vloeistof werd verzameld en geanalyseerd.
Om de BDDE-standaard (Sigma-Aldrich Co) onder alkalische omstandigheden (1%, 0,1% en 0,01% NaOH) te analyseren, als aan de volgende voorwaarden wordt voldaan, is het vloeibare monster 1:10, 1:100 of maximaal 1: 1.000.000 Gebruik indien nodig MilliQ gedeïoniseerd water voor analyse.
Voor de uitgangsmaterialen die in de verknopingsreactie werden gebruikt (HA 2%, H20, 1% NaOH en 0,049 mM BDDE), werd 1 ml van elk monster bereid uit deze materialen geanalyseerd met dezelfde analyse-omstandigheden.
Om de specificiteit te bepalen van de pieken die in de ionenkaart verschijnen, werd 10 µL van 100 ppb BDDE-standaardoplossing (Sigma-Aldrich Co) toegevoegd aan het 20 µL-monster.In dit geval is de eindconcentratie van de standaard in elk monster 37 ppb.
Bereid eerst een BDDE-voorraadoplossing voor met een concentratie van 11.000 mg/L (11.000 ppm) door 10 μL standaard BDDE (Sigma-Aldrich Co) te verdunnen met 990 μL MilliQ-water (dichtheid 1,1 g/mL).Gebruik deze oplossing om een 110 µg/L (110 ppb) BDDE-oplossing te bereiden als een tussenliggende standaardverdunning.Gebruik vervolgens het tussenproduct BDDE-standaardverdunningsmiddel (110 ppb) om de standaardcurve voor te bereiden door het tussentijdse verdunningsmiddel meerdere keren te verdunnen om de gewenste concentratie van 75, 50, 25, 10 en 1 ppb te bereiken.Zoals getoond in figuur 1 blijkt dat de BDDE-standaardcurve van 1,1 tot 110 ppb een goede lineariteit heeft (R2>0,99).De standaardcurve werd herhaald in vier onafhankelijke experimenten.
Figuur 1 BDDE standaard kalibratiecurve verkregen door LC-MS analyse, waarin een goede correlatie wordt waargenomen (R2>0.99).
Afkortingen: BDDE, 1,4-butaandioldiglycidylether;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspectrometrie.
Om de BDDE-standaarden die aanwezig zijn in de verknoopte HA en de BDDE-standaarden in de basisoplossing te identificeren en te kwantificeren, werd LC-MS-analyse gebruikt.
De chromatografische scheiding werd bereikt op een LUNA 2,5 m C18(2)-HST-kolom (50 x 2,0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, VS) en tijdens de analyse op kamertemperatuur (25°C) gehouden.De mobiele fase bestaat uit acetonitril (oplosmiddel A) en water (oplosmiddel B) dat 0,1% mierenzuur bevat.De mobiele fase wordt geëlueerd door gradiëntelutie.Het verloop is als volgt: 0 minuten, 2% A;1 minuut, 2% A;6 minuten, 98% A;7 minuten, 98% A;7,1 minuten, 2% A;10 minuten, 2% A. De looptijd is 10 minuten en het injectievolume is 20 µL.De retentietijd van BDDE is ongeveer 3,48 minuten (variërend van 3,43 tot 4,14 minuten op basis van experimenten).De mobiele fase werd gepompt met een stroomsnelheid van 0,25 ml/min voor LC-MS-analyse.
Voor BDDE-analyse en kwantificering door MS wordt het UPLC-systeem (Waters) gecombineerd met een API 3000 triple quadrupool massaspectrometer (AB SCIEX) uitgerust met een elektrospray-ionisatiebron, en de analyse wordt uitgevoerd in de positieve ionenmodus (ESI+).
Volgens de ionfragmentanalyse die op BDDE werd uitgevoerd, werd bepaald dat het fragment met de hoogste intensiteit het fragment was dat overeenkomt met 129,1 Da (Figuur 6).Daarom is in de multi-ionbewakingsmodus (MIM) voor kwantificering de massaconversie (massa-tot-ladingverhouding [m/z]) van BDDE 203,3/129,1 Da.Het maakt ook gebruik van de volledige scanmodus (FS) en de productiescanmodus (PIS) voor LC-MS-analyse.
Om de specificiteit van de methode te verifiëren, werd een blanco monster (initiële mobiele fase) geanalyseerd.Er werd geen signaal gedetecteerd in het blanco monster met een massaconversie van 203,3/129,1 Da.Met betrekking tot de herhaalbaarheid van het experiment werden 10 standaardinjecties van 55 ppb (in het midden van de kalibratiecurve) geanalyseerd, wat resulteerde in een resterende standaarddeviatie (RSD) <5% (gegevens niet getoond).
Het resterende BDDE-gehalte werd gekwantificeerd in acht verschillende geautoclaveerde BDDE-verknoopte HA-hydrogels, overeenkomend met vier onafhankelijke experimenten.Zoals beschreven in de sectie "Materialen en methoden", wordt de kwantificering geëvalueerd door de gemiddelde waarde van de regressiecurve van de BDDE-standaardverdunning, die overeenkomt met de unieke piek gedetecteerd bij de BDDE-massatransitie van 203,3/129.1 Da, met een retentie tijd van 3,43 tot 4,14 minuten Niet wachten.Figuur 2 toont een voorbeeldchromatogram van de 10 ppb BDDE-referentiestandaard.Tabel 1 vat het resterende BDDE-gehalte van acht verschillende hydrogels samen.Het waardebereik is 1 tot 2,46 ppb.Daarom is de resterende BDDE-concentratie in het monster acceptabel voor menselijk gebruik (<2 ppm).
Figuur 2 Ionenchromatogram van 10 ppb BDDE-referentiestandaard (Sigma-Aldrich Co), MS (m/z)-overgang verkregen door LC-MS-analyse van 203,30/129,10 Da (in positieve MRM-modus).
Afkortingen: BDDE, 1,4-butaandioldiglycidylether;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspectrometrie;MRM, monitoring van meerdere reacties;MS, massa;m/z, massa-tot-lading verhouding.
Opmerking: Monsters 1-8 zijn geautoclaveerd BDDE cross-linked HA hydrogels.De resterende hoeveelheid BDDE in de hydrogel en de piek van de BDDE-retentietijd worden ook vermeld.Ten slotte wordt ook het bestaan van nieuwe pieken met verschillende retentietijden gerapporteerd.
Afkortingen: BDDE, 1,4-butaandioldiglycidylether;HA, hyaluronzuur;MRM, monitoring van meerdere reacties;tR, retentietijd;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspectrometrie;RRT, relatieve retentietijd.
Verrassend genoeg toonde de analyse van het LC-MS-ionchromatogram aan dat op basis van alle geanalyseerde geautoclaveerde verknoopte HA-hydrogelmonsters, er een extra piek was bij de kortere retentietijd van 2,73 tot 3,29 minuten.Figuur 3 toont bijvoorbeeld het ionchromatogram van een verknoopt HA-monster, waarbij een extra piek verschijnt bij een andere retentietijd van ongeveer 2,71 minuten.De waargenomen relatieve retentietijd (RRT) tussen de nieuw waargenomen piek en de piek van BDDE bleek 0,79 te zijn (tabel 1).Omdat we weten dat de nieuw waargenomen piek minder wordt vastgehouden in de C18-kolom die wordt gebruikt in de LC-MS-analyse, kan de nieuwe piek overeenkomen met een meer polaire verbinding dan BDDE.
Figuur 3 Ionenchromatogram van verknoopt HA-hydrogelmonster verkregen door LC-MS (MRM-massaconversie 203,3/129,0 Da).
Afkortingen: HA, hyaluronzuur;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspectrometrie;MRM, monitoring van meerdere reacties;RRT, relatieve retentietijd;tR, retentietijd.
Om uit te sluiten dat de nieuwe waargenomen pieken mogelijk verontreinigingen zijn die oorspronkelijk in de gebruikte grondstoffen aanwezig waren, werden ook deze grondstoffen geanalyseerd met dezelfde LC-MS-analysemethode.De geanalyseerde uitgangsmaterialen omvatten water, 2% NaHA in water, 1% NaOH in water en BDDE in dezelfde concentratie als gebruikt in de verknopingsreactie.Het ionchromatogram van het gebruikte uitgangsmateriaal vertoonde geen verbinding of piek, en de retentietijd ervan komt overeen met de nieuwe waargenomen piek.Dit feit verwerpt het idee dat niet alleen het uitgangsmateriaal verbindingen of stoffen kan bevatten die de analyseprocedure kunnen verstoren, maar dat er geen teken is van mogelijke kruisbesmetting met andere laboratoriumproducten.De concentratiewaarden die zijn verkregen na LC-MS-analyse van BDDE en nieuwe pieken worden weergegeven in Tabel 2 (monsters 1-4) en het ionchromatogram in Figuur 4.
Opmerking: Monsters 1-4 komen overeen met de grondstoffen die worden gebruikt om geautoclaveerde BDDE-verknoopte HA-hydrogels te produceren.Deze monsters werden niet geautoclaveerd.
Afkortingen: BDDE, 1,4-butaandioldiglycidylether;HA, hyaluronzuur;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspectrometrie;MRM, monitoring van meerdere reacties.
Figuur 4 komt overeen met het LC-MS-chromatogram van een monster van de grondstof die wordt gebruikt in de verknopingsreactie van HA en BDDE.
Opmerking: Al deze worden gemeten bij dezelfde concentratie en verhouding die worden gebruikt om de verknopingsreactie uit te voeren.De getallen voor de door het chromatogram geanalyseerde grondstoffen komen overeen met: (1) water, (2) 2% HA-oplossing in water, (3) 1% NaOH-oplossing in water.LC-MS-analyse wordt uitgevoerd voor massaconversie van 203,30/129,10 Da (in positieve MRM-modus).
Afkortingen: BDDE, 1,4-butaandioldiglycidylether;HA, hyaluronzuur;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspectrometrie;MRM, monitoring van meerdere reacties.
De omstandigheden die leidden tot de vorming van nieuwe pieken werden bestudeerd.Om te bestuderen hoe de reactieomstandigheden die worden gebruikt om de verknoopte HA-hydrogel te produceren de reactiviteit van het BDDE-verknopingsmiddel beïnvloeden, wat leidt tot de vorming van nieuwe pieken (mogelijke bijproducten), werden verschillende metingen uitgevoerd.Bij deze bepalingen hebben we de uiteindelijke BDDE-crosslinker bestudeerd en geanalyseerd, die werd behandeld met verschillende concentraties NaOH (0%, 1%, 0,1% en 0,01%) in een waterig medium, gevolgd door of zonder autoclaveren.De bacterieprocedure om dezelfde omstandigheden te simuleren is dezelfde als de methode die wordt gebruikt om de verknoopte HA-hydrogel te produceren.Zoals beschreven in de sectie "Materialen en methoden", werd de massa-overgang van het monster geanalyseerd met LC-MS tot 203,30/129,10 Da.De BDDE en de concentratie van de nieuwe piek worden berekend en de resultaten zijn weergegeven in Tabel 3. Er werden geen nieuwe pieken gedetecteerd in de monsters die niet waren geautoclaveerd, ongeacht de aanwezigheid van NaOH in de oplossing (monsters 1-4, Tabel 3).Voor geautoclaveerde monsters worden nieuwe pieken alleen gedetecteerd in aanwezigheid van NaOH in de oplossing, en de vorming van de piek lijkt af te hangen van de NaOH-concentratie in de oplossing (monsters 5-8, Tabel 3) (RRT = 0,79).Figuur 5 toont een voorbeeld van een ionchromatogram, met twee geautoclaveerde monsters in aanwezigheid of afwezigheid van NAOH.
Afkortingen: BDDE, 1,4-butaandioldiglycidylether;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspectrometrie;MRM, monitoring van meerdere reacties.
Opmerking: Het bovenste chromatogram: Het monster werd behandeld met 0,1% NaOH-oplossing in water en geautoclaveerd (gedurende 20 minuten bij 120 °C).Bodemchromatogram: Het monster werd niet behandeld met NaOH, maar onder dezelfde omstandigheden geautoclaveerd.De massaconversie van 203,30/129,10 Da (in positieve MRM-modus) werd geanalyseerd met LC-MS.
Afkortingen: BDDE, 1,4-butaandioldiglycidylether;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspectrometrie;MRM, monitoring van meerdere reacties.
In alle geautoclaveerde monsters, met of zonder NaOH, was de BDDE-concentratie sterk verlaagd (tot 16,6 keer) (monsters 5-8, tabel 2).De afname van de BDDE-concentratie kan te wijten zijn aan het feit dat bij hoge temperaturen water kan werken als een base (nucleofiel) om de epoxidering van BDDE te openen om een 1,2-diolverbinding te vormen.De mono-isotopische kwaliteit van deze verbinding is anders dan die van BDDE en zal daarom niet worden aangetast.LC-MS detecteerde een massaverschuiving van 203,30/129,10 Da.
Ten slotte laten deze experimenten zien dat het genereren van nieuwe pieken afhangt van de aanwezigheid van BDDE, NAOH en het autoclaafproces, maar niets te maken heeft met HA.
De nieuwe piek gevonden bij een retentietijd van ongeveer 2,71 minuten werd vervolgens gekarakteriseerd door LC-MS.Voor dit doel werd BDDE (9,9 mg/ml) geïncubeerd in een 1% NaOH waterige oplossing en geautoclaveerd.In Tabel 4 worden de kenmerken van de nieuwe piek vergeleken met de bekende BDDE-referentiepiek (retentietijd ongeveer 3,47 minuten).Op basis van de ionfragmentatie-analyse van de twee pieken kan worden geconcludeerd dat de piek met een retentietijd van 2,72 minuten dezelfde fragmenten vertoont als de BDDE-piek, maar met verschillende intensiteiten (Figuur 6).Voor de piek die overeenkomt met de retentietijd (PIS) van 2,72 minuten, werd een intensere piek waargenomen na fragmentatie bij een massa van 147 Da.Bij de BDDE-concentratie (9,9 mg/ml) die bij deze bepaling werd gebruikt, werden ook verschillende absorptiemodi (UV, λ=200 nm) in het ultraviolette spectrum waargenomen na chromatografische scheiding (Figuur 7).De piek met een retentietijd van 2,71 minuten is nog zichtbaar bij 200 nm, terwijl de BDDE-piek onder dezelfde omstandigheden niet in het chromatogram kan worden waargenomen.
Tabel 4 Karakteriseringsresultaten van de nieuwe piek met een retentietijd van ongeveer 2,71 minuten en de BDDE-piek met een retentietijd van 3,47 minuten
Opmerking: om deze resultaten te verkrijgen, werden LC-MS- en HPLC-analyses (MRM en PIS) uitgevoerd op de twee pieken.Voor HPLC-analyse wordt UV-detectie met een golflengte van 200 nm gebruikt.
Afkortingen: BDDE, 1,4-butaandioldiglycidylether;HPLC, hogedrukvloeistofchromatografie;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspectrometrie;MRM, monitoring van meerdere reacties;m/z, massa-tot-lading verhouding;PIS, product Ionenscanning;ultraviolet licht, ultraviolet licht.
Opmerking: De massafragmenten worden verkregen door LC-MS-analyse (PIS).Bovenste chromatogram: massaspectrum van BDDE-standaardmonsterfragmenten.Bodemchromatogram: het massaspectrum van de nieuwe gedetecteerde piek (RRT geassocieerd met de BDDE-piek is 0,79).BDDE werd verwerkt in 1% NaOH-oplossing en geautoclaveerd.
Afkortingen: BDDE, 1,4-butaandioldiglycidylether;LC-MS, vloeistofchromatografie en massaspectrometrie;MRM, monitoring van meerdere reacties;PIS, productie-ionenscan;RRT, relatieve retentietijd.
Figuur 7 Ionenchromatogram van het 203,30 Da-precursorion, en (A) de nieuwe piek met een retentietijd van 2,71 minuten en (B) de UV-detectie van de BDDE-referentiestandaardpiek bij 3,46 minuten bij 200 nm.
In alle geproduceerde verknoopte HA-hydrogels werd waargenomen dat de resterende BDDE-concentratie na LC-MS-kwantificering <2 ppm was, maar er verscheen een nieuwe onbekende piek in de analyse.Deze nieuwe piek komt niet overeen met het BDDE-standaardproduct.Het BDDE-standaardproduct heeft dezelfde kwaliteitsconversie (MRM-conversie 203.30/129.10 Da) ook in de positieve MRM-modus ondergaan.Over het algemeen worden andere analytische methoden zoals chromatografie gebruikt als limiettests om BDDE in hydrogels te detecteren, maar de maximale detectielimiet (LOD) is iets lager dan 2 ppm.Aan de andere kant zijn tot dusver NMR en MS gebruikt om de mate van verknoping en/of modificatie van HA in de suikereenheidfragmenten van verknoopte HA-producten te karakteriseren.Het doel van deze technieken is nooit geweest om de resterende BDDE-detectie te kwantificeren bij zulke lage concentraties zoals we in dit artikel beschrijven (LOD van onze LC-MS-methode = 10 ppb).
Posttijd: 01-sep-2021